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魚ELISA試劑盒可以利用酶催化底物反應(yīng)的生物放大作用

更新時間:2018-05-28      瀏覽次數(shù):1590
魚ELISA試劑盒技術(shù)雖已廣泛應(yīng)用于免疫學(xué)的研究與診斷,但是熒光抗體染色標(biāo)本不能長期保存,對組織細(xì)胞的細(xì)微結(jié)構(gòu)分辨不清,免疫酶技術(shù)則能克服上述不足,標(biāo)記免疫酶技術(shù)的敏感性更優(yōu)于免疫熒光法,對石蠟切片標(biāo)本尤為適用,為免疫病理研究開辟了一條新途徑,酶顯色產(chǎn)物具有較高的電子密度,經(jīng)過適當(dāng)處理還可以進行免疫電鏡觀察,免疫酶組化技術(shù)分為酶標(biāo)記法與非標(biāo)記抗體技術(shù),前者是將酶通過交聯(lián)劑結(jié)合在抗體分子上,形成酶標(biāo)記抗體。后者是將酶作為抗原與相應(yīng)的特異性抗體連接進行的免疫反應(yīng),稱為非標(biāo)記抗體酶技術(shù)。
魚ELISA試劑盒技術(shù)利用酶催化底物反應(yīng)的生物放大作用,提高特異性抗原-抗體免疫學(xué)反應(yīng)檢測敏感性的一種標(biāo)記免疫技術(shù)。該技術(shù)所用的酶要求純度高、催化反應(yīng)的轉(zhuǎn)化率高、專一性強、性質(zhì)穩(wěn)定、來源豐富、價格不貴、制備成的酶標(biāo)抗體或抗原性質(zhì)穩(wěn)定,繼續(xù)保留著它的活性部分和催化能力。在受檢標(biāo)本中不存在與標(biāo)記酶相同的酶。另外它的相應(yīng)底物應(yīng)易于制備和保存,價格低廉,有色產(chǎn)物易于測定,光吸收高。
ELISA試劑盒固相載體采用免疫酶技術(shù)
魚ELISA試劑盒技術(shù)的主要試劑為固相的抗原或抗體、酶標(biāo)記的抗原或抗體和與標(biāo)記酶直接關(guān)聯(lián)的酶反應(yīng)底物。可作固相載體的物質(zhì)很多,zui常用的是聚苯乙烯。聚苯乙烯具有較強的吸附蛋白質(zhì)的性能,抗體或蛋白質(zhì)抗原吸附其上后保留原來的免疫活性。聚苯乙烯為塑料,可制成各種形式,在測定過程中,它作為載體和容器,不參與化學(xué)反應(yīng),加之它的價格低廉,所以被普遍采用。
魚ELISA試劑盒的形狀主要有三種:小試管、小珠和微量反應(yīng)板。小試管的特點是還能兼作反應(yīng)的容器,zui后放入分光光度計中比色。小珠一般為直徑0.6cm的圓球,表面經(jīng)磨砂處理后吸附面積大增加。如用特殊的洗滌器,在洗滌過程中使圓珠滾動淋洗,效果更好。zui常用的載體為微量反應(yīng)板,于ELISA測定的產(chǎn)品也稱為ELISA板,通用的標(biāo)準(zhǔn)板形是8×12的96孔式。為便于作少量標(biāo)本的檢測,有制成8聯(lián)或l2聯(lián)孔條的,放入座架后,大小與標(biāo)準(zhǔn)ELISA板相同。ELISA板的特點是可以同時進行大量標(biāo)本的檢測,并可在特定的比色計上迅速讀出結(jié)果。現(xiàn)在已有多種自動化儀器用于微量反應(yīng)板型的ELISA檢測,包括加樣、洗滌、保溫、比色等步驟,對操作的標(biāo)準(zhǔn)化極為有利。
1、魚ELISA試劑盒基因工程試劑對免疫測定技術(shù)發(fā)展的影響
免疫測定技術(shù)的基礎(chǔ)在于抗原抗體之間的特異結(jié)合反應(yīng),所以任何的診斷試劑離不開的原料,如抗原抗體,酶等。以前用于免疫測定的抗原通常為各種純化抗原,而抗體則為純化抗原免疫動物后獲得的多克隆抗體和使用雜交瘤技術(shù)得到的單克隆抗體,而抗原或抗體的標(biāo)記物如酶標(biāo)結(jié)合物則通過各種化學(xué)合成方法制備。近年來,隨著分子生物學(xué)的發(fā)展,使用基因工程方法制備各種特殊的抗原或抗體及其酶結(jié)合物等免疫測定試劑幾成為現(xiàn)實的新一代試劑,各種新型使用的測定方法也不斷出現(xiàn)。
2、魚ELISA試劑盒基因工程
較早用于免疫測定的基因工程抗原是HBcAg和HBsAg,這兩種基因工程抗原的出現(xiàn),較好地解決了抗HBc和HBe的測定問題。因為要從病毒本身去大量獲取這兩種純抗原較為困難,并且這一點對于難培養(yǎng)的病原微生物來說,如HIV、HCV和梅毒螺旋體等都有些共性。
魚ELISA試劑盒HCV目前尚不能體外培養(yǎng),只能用基因工程或化學(xué)合成方法獲取HCV結(jié)構(gòu)和非結(jié)構(gòu)區(qū)的各種抗原片斷,已知HCV基因組有7個功能區(qū)組成:核心、E1、E2/NS1 NS2 NS3 NS4 NS5(有分為NS和NS5b)區(qū),合成抗原的優(yōu)點是易于純化,特異性好,抗原抗體反應(yīng)強。 
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